無細胞蛋白表達后零處理進行BLI(Biolayer Interferometry)

更新時間：2025-07-11 點擊次數(shù)：1130

近日，珀羅汀生物收到某藥企研發(fā)團隊的反饋：使用兩款PLD無細胞蛋白表達試劑（PLDK001、PLDK002），成功實現(xiàn)3個蛋白的高效表達，并通過BLI檢測無細胞反應(yīng)后上清快速完成了功能性驗證！

生物層干涉術(shù)（Biolayer Interferometry, BLI）是一種非標記的、實時監(jiān)測的先進技術(shù)，主要用于生物分子間或是生物分子與小分子間相互作用分析。在蛋白與配體的相互作用檢測時，基于傳統(tǒng)細胞表達的蛋白樣品通常需要經(jīng)過復(fù)雜的細胞破碎、純化等前處理。然而在本案例中，通過無細胞表達技術(shù)獲得的重組蛋白，實現(xiàn)了上清液零處理直接BLI檢測！

無細胞蛋白表達后零處理進行BLI(Biolayer Interferometry)

圖1 ：基于傳統(tǒng)細胞表達系統(tǒng)的BLI檢測與本案例基于無細胞表達（CFPS）的BLI檢測流程對比示意圖

本案例實驗結(jié)果可謂亮點紛呈

1.高可溶表達：SDS-PAGE清晰顯示，3個蛋白在無細胞表達上清液中均呈現(xiàn)強目的條帶（圖1），傳統(tǒng)大腸桿菌系統(tǒng)中易形成的包涵體難題被破解！

圖2：三個蛋白在PLDK001、PLDK002試劑盒中表達的SDS-PAGE膠圖

2.低背景：蛋白3經(jīng)BLI（生物膜層干涉技術(shù)）檢測顯示：帶His標簽的目的蛋白與背景信號區(qū)分度高（圖3），表明表達產(chǎn)物背景干擾小，無需復(fù)雜純化即可直接用于下游結(jié)合實驗。

圖3：BLI通過抗His捕獲傳感器可從表達上清中捕獲蛋白3

3.強親和活性：最令人振奮的是——蛋白2與其配體蛋白的BLI實時結(jié)合曲線顯示典型高效結(jié)合特征，表明該蛋白具有強親和活性！這種無細胞快速表達+BLI快速檢測親和活性的方案，將為藥物靶點蛋白篩選貢獻新速度。

圖4：蛋白2與其配體蛋白有強親和活性

無細胞蛋白表達技術(shù)：推動靶點蛋白開發(fā)的“高能引擎"

從基因到蛋白，再到活性驗證，珀羅汀無細胞蛋白表達技術(shù)猶如“高能引擎"，推動靶點蛋白極速表達，為藥物發(fā)現(xiàn)提供“無細胞速度"。對于分秒必爭的新藥研發(fā)，速度即是壁壘，活性就是王-道！此次客戶的成功實踐，驗證了珀羅汀無細胞表達平臺的三重價值：

√ 打破表達壁壘——高難度蛋白輕松可溶表達；

√ 跳過純化瓶頸——表達上清直通活性檢測；

√ 壓縮研發(fā)周期——將傳統(tǒng)數(shù)周流程縮短至數(shù)天！

對比傳統(tǒng)細胞表達系統(tǒng)，珀羅汀無細胞技術(shù)在此次案例中展現(xiàn)出壓倒性優(yōu)勢：